El Camino Real de Tierra Adentro atravesaba 200 km por el estado de Guanajuato. Gracias a la búsqueda de agua potable por soldados y ganaderos, fue posible forjar las rutas de este camino, pues la ubicación geográfica de este estado convertía al agua en un recurso escaso.

La UNESCO destaca seis sitios del Camino Real de Tierra Adentro en Guanajuato como Patrimonio Mundial: el Puente La Quemada, el Puente de San Rafael, el Centro histórico de la ciudad de Guanajuato y sus minas adyacentes, el Puente de El Fraile, el Antiguo Real Hospital de San Juan de Dios de San Miguel de Allende y la Villa Protectora de San Miguel el Grande y Santuario de Jesús Nazareno de Atotonilco.